Форум магазина Волшебство Дома для увлечённых модным hand-made, мыловарением, домашней косметикой, свечами и другим рукоделием в г. Саратове
 
ФорумКалендарьЧаВоПоискПользователиГруппыРегистрацияВход
Навигация
 Портал
 Форум
 Пользователи
 Профиль
 ЧаВо
 Поиск
Последние темы
» Крем для лица
Чт Май 14, 2015 11:56 pm автор Tyulyulyueva

» Уход за ресницами
Вт Дек 30, 2014 10:52 am автор irina260

» Наличие в магазине.
Пт Авг 15, 2014 8:35 pm автор lordfarmstrong

» Радости в душе от Monesper
Ср Май 28, 2014 7:06 pm автор Demona

» Масло ши (карите) Shea butter
Вс Янв 05, 2014 4:57 am автор Виолетта

» Водорастворимая бумага
Пт Ноя 22, 2013 5:12 am автор Валерия

» Кто чем увлекается?
Вс Сен 15, 2013 3:23 am автор Людмилка)

» Наши шипучие бомбы и пралине для ванны.
Чт Июн 20, 2013 11:52 pm автор Анжела Кулеш

» Компоненты для домашней косметики
Пн Май 13, 2013 6:15 pm автор RetroGirl

Ключевые слова
Навигация
 Портал
 Форум
 Пользователи
 Профиль
 ЧаВо
 Поиск

Поделиться | 
 

 "Гиалуроновая кислота (низкомолекулярная)"

Предыдущая тема Следующая тема Перейти вниз 
АвторСообщение
Арома Леди

avatar

Сообщения : 192
Дата регистрации : 2010-02-16
Возраст : 31
Откуда : Саратов

СообщениеТема: "Гиалуроновая кислота (низкомолекулярная)"   Вт Сен 25, 2012 9:20 pm

Недавние исследования показали, что ГК участвует в процессах тканевой регенерации, интегрируясь в матрич¬ные структуры, поддерживая целостность и баланс компо¬нентов матрикса при деградации и реконструкции, обеспе¬чивая нормальный жизненный тонус кожного покрова и восстановление его после повреждения. Эти свойства делают ГК важным компонентом косметических средств, в которых она может использоваться для разглаживания морщин или устранения антивозрастных явлений.


Введение

Гиалуроновая кислота (ГК) является линейным поли¬сахаридом, состоящим из повторяющихся дисахаридных участков глюкуроновой кислоты и N-ацетил. В отличие от других гликозаминогликанов (например, дерматансульфата или кератинсульфата), ГК не содержит серы. Гиалуроновая кислота является одним из важных ком¬понентов межклеточного матрикса, в который «встрое¬ны» клетки и упругие волокна матрикса — коллаген и эластин. Другим уникальным свойством ГК является ее высокая способность связывать воду. В растворе ГК на¬ходится в пластичном, спиралеобразном состоянии, что позволяет ей связывать воду. Благодаря данному свой¬ству, ГК играет важную роль в поддержании гомеостаза межклеточного пространства и принимает участие в ре¬гулировании обмена межклеточной жидкости.

Недавние исследования показали, что ГК участвует в процессах тканевой регенерации, интегрируясь в матрич¬ные структуры, поддерживая целостность и баланс компо¬нентов матрикса при деградации и реконструкции, обеспе¬чивая нормальный жизненный тонус кожного покрова и восстановление его после повреждения. Эти свойства делают ГК важным компонентом косметических средств, в которых она может использоваться для разглаживания морщин или устранения антивозрастных явлений.

Существенным ограничением при косметическом применении ГК является ее большая молекулярная мас-са, которая может доходить до 2 млн Да. Тем не менее небольшие фрагменты могут проникать через кожный барьер (особенно, если он поврежден или ослаблен). Не¬давние исследования показали, что фрагменты ГК с мо¬лекулярной массой менее 20 кДа могут связываться с так называемыми Толл-подобными рецепторами (TLRs) 2-го и 4-го типа и активировать клетки, что в конечном итоге приводит к выделению медиаторов воспаления. Таким образом, целью настоящего исследования было определить тот оптимальный молекулярный размер ГК, при котором, с одной стороны, она оказывала выражен¬ное антивозрастное и увлажняющее действие, а с другой, не вызывала негативные последствия активации рецеп¬торов TLRs и выработки медиаторов, запускающих воспа¬лительную реакцию.


Материалы и методы

Оценка диффузии ГК

Диффузию гиалуроновой кислоты молекулярной массой 50, 300, 800 и 1500 кДа исследовали на дерматоме кожи свиного уха с использованием диффузионной ячейки Франца [п]. Молекулы ГК «метили» радиоактив¬ным тритием.

Методика исследования заключается в следующем: у 5-месячной свиньи забирают кусочек неповрежденной кожи с уха, затем дерматомом срезают образец кожи для испытаний толщиной около 750 микрометров, используя аппарат Acculan GA 643 (Aesculap, Германия). Образцы помещают в модифицированные ячейки Франца для ис¬следования чрескожного проникновения таким образом, чтобы внешняя поверхность (роговой слой) была обра¬щена к донорской камере.
Через 5 и 22 ч экспозиции определяют уровень радио¬активности (в нг×см-2/ч), который принимают за параметр чрескожной диффузии.

Клеточная культура


Реконструированный человеческий эпидермис (про¬изводство SkinEthic, Франция) инкубировали до начала эксперимента при температуре 37 °С и содержании СО2 около 5 %. Перед исследователями стояла задача исключить ве¬роятный провоспалительный эффект, вызванный низ¬комолекулярной фракцией гиалуроновой кислоты. Для этого реконструированный человеческий эпидермис помещали на 48 ч в о,5 % водный раствор ГК (производство Novozymes, Дания) в концентрации 20, 50, 130 или 320 кДа.
Другой задачей исследования было выявление внеш¬них характерных эффектов ГК, и с этой целью на поверх¬ность образцов реконструированного человеческого эпидермиса наносили 50 мкл 0,5 % водного раствор ГК в концентрации 50 или 8оо кДа ГК и оставляли на 48 ч.

Выделение РНК

Общую РНК выделяли из опытных образцов клеток кожи с помощью набора RNeasy Mini Kit (Qiagen, Германия) в порядке, описанном в инструкции к данному набору.
Концентрацию РНК определяли методом спектроско¬пии на приборе SmartSpec Plus (Biorad, Германия).
Гомогенность и целостность РНК исследовали на био¬анализаторе Agilent 2100 с набором реагентов 6000 Nano LabChip (Agilent Technologies.CLUA).
Образцы РНК хранили до анализа при температу¬ре -80 С.

ДНК-микропанельное исследование и анализ данных


Экспрессию генов определяли с использованием приборов Affymetrix HGU133 и 2.0 GeneChips (Affymetrix, США), для анализа брали 2 мкг РНК собранного из трех образцов реконструированной человеческой кожи. Вы¬деление генов и первичный анализ проводили по ранее описанной методике.

Метод RT-PCR (полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой)

Обратная транскрипция (RT) производилась с помощью набора First-Strand-cDNA Synthesis Kit (Super Script III, Invitrogen, USA) с 100 неочищенной РНК, забранной из каждого образца. Транскрипция осуществлялась соглас¬но инструкции по использованию набора.
Количественный ПЦР-анализ производился на аппара¬те Opticon DNA engine (MJ Research Software, Германия).

Исследование in vivo

In vivo эффекты различных по массе молекул ГК (50, 130 и зоо кДа) исследовали в плацебо-контролируемом 8-недельном исследовании с применением крема, содер¬жащего водно-жировую эмульсию с 0,1% гиалуронатом натрия.

В эксперименте участвовали 12 женщин-волонтеров в возрасте от 30 до 60 лет. Крем наносили дважды в день в течение 60 дней. После чего анализировали ряд пара¬метров шероховатости и микрорельефа кожи с исполь¬зованием реплик поверхности кожи (SILFLO Flexico Ltd., Зеликобритания).

В данной методике использовали специальные ди¬ски с липкой поверхностью (производство компании ЗМ, США, размеры 24 x 40 мм), которые укрепляли на поверхности кожи волонтеров для того, чтобы ограничить исследуемый участок и предотвратить натяжение кожи во время нанесения полимера. Затем на участок кожи внутри диска наносили небольшое количество полиме¬ра, который затвердевал в течение пяти минут. Диск уда¬ляли, полученный слепок (реплика) аккуратно снимали и исследовали с помощью специального программного обеспечения (Quantilines, Monaderm, Франция), которое позволяло проводить общий анализ данных ряда параметров рельефа кожи в соответствии с методикой, описанной Corcuff.


Результаты и обсуждение

На участках воспаления ГК подвергается быстрой деградации под действием гиалуронидазы, которая в боль¬ших количествах вырабатывается клетками, вовлеченными в воспалительный процесс.

Продукты распада ГК активно включаются в процессы повреждения и репарации, так как доказано, что они активируют прововоспалительную деятельность макрофагов, дендритных клеток (клетки Лангерганса), активируя в них синтез медиаторов воспаления и ферментов, разрушающих межклеточный матрикс. Недавние иссле¬дования выявили, что связывание фрагментов распада ГК рецептором TLR-4 напрямую активизирует клетки, участвующие в воспалительной реакции (на стадии миграции и активации макрофагов). Так как на кератиноцитах присутствуют рецепторы TLR-4, то возможно, что расщепление ГК на низкомолекулярные фрагменты напрямую связано с опасностью провоцирования воспалительной реакции.

Для определения порога молекулярной массы и размера фрагментов ГК, при котором начинает проявляться их прововоспалительный эффект, образцы кожи помещали в растворы ГК с разным весом (20, 50, 130 и 300 кДа). Как индикатор, при котором срабатывает пусковой механизм воспалительного ответа, использовалась экспрессия TNF-a. На рис. 1 можно видеть, что молекулы гиалуроновой кислоты с молекулярным весом свыше 50 кДа не проявляют подобных эффектов.

Эти данные позволяют сделать вывод о том, что в воспалительной реакции кератиноциты играют вспомогательную роль не только за счет продук¬ции различных цитокинов, таких как TNF-a. Согласно по-лученным результатам, ГК с молекулярным весом менее го кДа не может применяться из-за риска развития воспаления, тогда как применение ГК с размером 50 кДа с этой точки зрения уже является безопасным .

После определения наименьшего молекулярного размера молекулы ГК, при котором не запускается пу-сковой механизм воспалительной реакции, следующим шагом эксперимента было исследование воздействия ГК на кератиноциты на генном уровне. Для этих целей ГК с молекулярной массой 50 кДа наносили на реконструиро¬ванный человеческий эпидермис на срок 48 часов. Далее экстрагировали РНК для транскриптивного анализа с ис¬пользованием микрочиповой технологии. Для сравнения г тот же эксперимент проводили с ГК массой 800 кДа, кото¬рая широко применяется в настоящее время в косметологии в качестве увлажняющего ингредиента в косметиче¬ских средствах.

По сравнению с ГК массой 800 кДа, которая индуцирует экспрессию 40 генов, гиалуроновая кислота с массой 50 кДа воздействует уже на 120 генов, включая гены, играющие ключевую роль в регуляции жизнедеятельности кератиноцитов, например гены, регулирующие экспрессию белков, отвечающих за межклеточные контакты.

Воспалительная реакция в этом опыте не наблюдалась.
Отдельно был проведен эксперимент по изучению проникающих свойств ГК разной молекулярной массы — 50, 300, 800 и 1500 кДа (рис.3). Было показано, что пенетрация низкомолекулярной гиалуроновой кислоты с массой 50 кДа после 5-часовой экспозиции была по к меньшей мере в три раза выше по сравнению с пентрацией ГК массой 300 кДа. Эти результаты убедительно г доказывают, что существует зависимость трансэпидермального транспорта ГК от ее молекулярного веса, и к низкомолекулярные фракции проникают в кожу значительно лучше.



Исследования in vitro показывают, что ГК с массой 50 кДа проникает через кожу намного лучше, нежели чем ГК с массой 800 кДа и активизирует большее количестве рецепторов. Для того чтобы изучить, как эти in vitro эффекты проявляются в условиях in vivo, мы провели8-недельный плацебо-контролируемый эксперимент с тремя фракциями гиалуроновой кислоты разной массы Исследование показало, что ГК с массой 50 кДа не только значительно снижает шероховатость кожного покрова (рис. 4 а-в), но и обладает выраженным эффектом раз¬глаживания морщин (рис. 4 г-д). Более того, этот эффект больше выражен у ГК с массой 50 кДа по сравнению ГН массой 800 кДа, которая не показала такого эффекта, но широко используется благодаря очень хорошим увлаж¬няющим свойствам.


Заключение

В результате настоящего исследования было убеди¬тельно доказано, что ГК не просто обладает полезными для кожи свойствами, но эти свойства могут контролиро¬ваться за счет применения ГК различного молекулярного веса.
Было доказано, что низкомолекулярная гиалуроновая кислота лучше транспортируется через кожный покров, нежели чем ГК с высокой молекулярной массой, а также активирует большее количество генов кератиноцитов, включая гены, отвечающие за дифференцировку кера¬тиноцитов и формирование комплексов межклеточных контактов, количество которых снижается в фотоповрежденной и стареющей коже.
Эти молекулярные эффекты ГК определяют и раз¬личия в проявлении in vivo эффектов. В исследовании было показано, что увлажняющий эффект и повышение эластичности кожи в большей мере свойственны ГК с высокой молекулярной массой, тогда как разглаживающий эффект продемонстрировала ГК с низкой молекулярной массой.
Увеличение активности при снижении молекулярного веса гиалуроновой кислоты может объясняться повыше¬нием трансэпидермального проникновения для молекул ГК меньшего размера.
Исследование впервые показало, что аппликация низкомолекурной ГК приводит к активизации физиологиче¬ских процессов кожи и получению омолаживающего эф¬фекта, который может быть достигнут за счет повышения проницаемости и уменьшения молекулярной массы.

Источник:http://aroma-vita.com.ua/nizkomolekulyarnaya-gialuronovaya-kislota.html
Вернуться к началу Перейти вниз
Посмотреть профиль
 
"Гиалуроновая кислота (низкомолекулярная)"
Предыдущая тема Следующая тема Вернуться к началу 
Страница 1 из 1

Права доступа к этому форуму:Вы не можете отвечать на сообщения
Форум Волшебство Дома :: Библиотека :: Косметические компоненты-
Перейти: